Синтез циклічного пептиду

Синтез циклічних пептидів|Спеціальні циклічні пептиди|Зшиті пептиди|Циклізація бічного ланцюга|Наука-Пептид

Метаопис

Потрібні складні циклічні пептиди? Послуга Science-Cyclic Peptide Synthesis охоплює першу й останню циклізацію, циклізацію бічного ланцюга, зшитий пептид, з’єднання кількох дисульфідних зв’язків. 20 років досвіду роботи зі складними циклічними пептидами, стабільну доставку. Будь ласка, не соромтеся звертатися до нас.

Циклічний пептид: вдосконалена версія лінійного пептиду

Чому саме циклічні пептиди?
Кожен, хто працював із пептидами, знає, що лінійні пептиди працюють добре, але іноді вони працюють не так добре - вони розщеплюються ферментами протягом короткого часу після потрапляння в організм або вони недостатньо міцно зв’язуються з цільовим сайтом. Перетворення лінійних пептидів у петлі є найпрямішим способом вирішення цих проблем.

Циклічні пептиди мають більш фіксовану конформацію, і їх непросто розрізати протеазами; коли вони поєднані з ціллю, оскільки структура була заблокована, втрата ентропії невелика, а сила зв’язування сильніша. Багато природних активних пептидів мають циклічну природу, наприклад антибактеріальні пептиди та імунодепресанти, для яких еволюція давно вибрала напрямок для нас.

Однак складність синтезу циклічних пептидів справді набагато вища, ніж у лінійних пептидів. Ми вже наступали на ці вибоїни і знаємо, як їх обійти, наприклад, низька ефективність утворення кільця, багато побічних реакцій, неможливість відновити очищення.

Що ми можемо зробити з дзвінком?

1. Циркуляризація: залежно від того, що ви хочете

Тип циклізації	як	Коли це використовувати
Перше і останнє кільцеподібне утворення	N{0}}end і C-end безпосередньо пов’язані	Як імітація природних циклічних пептидів, зазвичай використовуються короткі пептиди
циклізація-бічного ланцюга	циклізація через бічні ланцюги Lys, Glu і Asp	Ви хочете залишити кінець для обробки, або кільце більше
циклізація дисульфідного зв'язку	Утворення дисульфідного зв'язку між Cys	Антимікробні пептиди, пептиди токсинів, найбільш природні
Зшиті пептиди	Вуглеводневий ланцюг закріплює спіраль	Стабілізація альфа-спіралі та посилення проникнення через мембрану
Циклізація сірчаного ефіру	Не-природне зв’язування, більш стійке до ферментативної деградації	Для виготовлення ліків потрібна висока метаболічна стабільність

Залежно від вашої цільової структури ми визначимо, яка циклізація є найбільш підходящою. Першим кроком у синтезі циклічних пептидів є вибір правильного методу циклізації.

2. Дисульфідні зв'язки: зроблено від однієї до чотирьох пар
Однопарний дисульфідний зв'язок: звичайна операція, рівень успіху понад 95%.
Дві пари дисульфідних зв’язків: необхідно контролювати порядок сполучення, ми маємо ортогональну стратегію захисту.
Три або більше пар: до чотирьох пар, які відкриваються та зіставляються одна за одною.

3. Довжина: 2-60 амінокислот після циклізації
Чим довший циклічний пептид, тим кращий, тим довше буде знижуватися ефективність циклізації. Найдовший циклічний пептид, який ми коли-небудь створювали, складається з 60 амінокислот, і ми спочатку синтезували лінійний фрагмент сегментами, а потім циклізували його в рідкій фазі.

4. Чистота: залежно від стадії експерименту

Рівень чистоти	Відповідні сценарії
Сирий (70-85%)	Початкова перевірка, спочатку перевірте, чи активна вона, заощадьте гроші
Звичайна чистота (85-95%)	Клітинні експерименти в поєднанні з дослідами, які
Висока чистота (95-98%)	Експерименти на тваринах, функціональна перевірка
Ultrapure (>98%)	Кристалічна структура, ЯМР

Кожен циклічний пептид супроводжується звітами ВЕРХ і МС, а ефективність циклізації, залишковий лінійний пептид і чистота чітко позначені.

5. Кільце також можна модифікувати
Флуоресцентне маркування: FITC, TAMRA, Cy5, хочу побачити, куди йде циклічний пептид.
Біотин: витягніть-знизу або спробуйте.
Пегілювання: подовження періоду напіввиведення in vivo.
Амінокислоти типу D-: покращують стабільність.

Чому варто звернутися до нас за синтезом циклічних пептидів?

1. Ми робимо цю роботу 20 років
Синтез циклічних пептидів — це не просто кидання лінійного пептиду в реакційний флакон і перемішування. Якщо умови циклізації дещо відхиляються, або врожай буде настільки низьким, що ви будете сумніватися у своєму житті, або буде багато побічних-продуктів, які неможливо відокремити.

Циклізація трансмембранних пептидів, конотоксин із трьома парами дисульфідних зв’язків, скоблені спіральні пептиди - протягом багатьох років ми впоралися з багатьма важкими циклічними пептидами. Ми добре розуміємо, які послідовності легко полімеризувати та які умови можуть їх зберегти. Якщо ви прийшли до нас на циклічний пептидний синтез, принаймні вам не доведеться наступати на яму з самого початку.

2. Стратегії циклізації: тверда або рідка фаза, вибір за вами
Циклізація в твердій- фазі: пряме утворення кільця на смолі, підходить для коротких пептидів і циклізації бічних ланцюгів, проста в експлуатації, підходить для високої продуктивності.
Рідкофазна циклізація: очищення лінійних пептидів з наступною циклізацією, підходить для довгих пептидів або коли потрібні розбавлені умови, щоб уникнути полімеризації.
Дво{0}}етапний метод: твердофазний-синтез лінійного пептиду, очищення, а потім рідинна{2}}фазова циклізація для збалансування чистоти та виходу.
Немає-однозначного-підходу-для всіх. Ми підберемо найнадійніший маршрут на основі вашої послідовності та методу циклізації.

3. Відповідність дисульфідного зв’язку: без здогадок, без стратегії
Найскладнішим у кількох парах дисульфідних зв’язків є порядок сполучення. У нас є ортогональна стратегія захисту, яка може відкривати та з’єднувати їх один за одним, щоб забезпечити з’єднання дисульфідних зв’язків у потрібному місці.

4. Контроль якості: кожен циклічний пептид документується
MS: Спочатку подивіться, чи правильна молекулярна маса (на 18 або більше менше, ніж лінійна після циклізації, залежно від методу утворення кільця).
ВЕРХ: подивіться на чистоту, а також на те, скільки лінійних пептидів не є циклічними.
Додатково: вміст пептидів, ендотоксин, вологість.
Виконуючи циклічний пептидний синтез, дані говорять самі за себе, жодної неправди.

5. Від малих до великих, без зміни постачальників
Міліграми на етапі скринінгу, десять міліграмів на етапі перевірки, сто міліграмів на грами на доклінічному етапі - ми можемо зробити все. Той самий проект, той самий аналог, не потрібно повторно -гармонізувати.

Для чого можна використовувати циклічні пептиди?

Напрямки досліджень	Загальне використання	Циклізаційний підхід
Антимікробні пептиди	Покращена стабільність, менш сприйнятливий до ферментативного розщеплення	циклізація дисульфідного зв’язку, циклізація голови-до-хвоста
Протипухлинні пептиди	Покращена прив’язка до цілі	зшиті пептиди, циклізація бічного ланцюга
імуносупресія	аналоги циклоспорину	Перше і останнє кільцеподібне утворення
пептиди,-проникаючі в клітину	Поліпшення здатності проникати в клітини, що	Зшиті пептиди
дослідження токсинів	Конотоксин, пептиди зміїної отрути	Кілька пар дисульфідних зв'язків
пептидні гормони	подовжений період напіврозпаду-	циклізація-бічного ланцюга
діагностичні реагенти	Кільцевий зонд, хороша специфічність	можуть бути помічені біотином або флуоресцентними маркерами

Доставка та контроль якості

Доставка: ліофілізований порошок, центрифужні пробірки або флакони, захищені азотом.
Супровідні документи: COA (профіль ВЕРХ + MS-спектр), MS/MS (для підтвердження сполучення сайту циклізації/дисульфідного зв’язку).
Додаткові тести: вміст пептидів, ендотоксин, вологість, амінокислотний склад.
Індивідуальна упаковка: порції та маркування відповідно до ваших вимог.
Кожен продукт Cyclic Peptide Synthesis проходить подвійну-перевірку, щоб забезпечити правильну циклізацію та чистоту перед відправленням.

Три правдиві історії

Випадок 1: Антимікробна пептидна програма науково-дослідного інституту

The client wanted a cyclic peptide containing two pairs of disulfide bonds, 28 amino acids, of natural origin. We designed an orthogonal protection strategy, forming the first pair first, then oxidizing to form the second pair. Finally, the purity of the cyclic peptide is >95%, дисульфідні зв’язки правильно спарені, активність перевірена.

Випадок 2: проект багатонаціональної фармацевтичної компанії зі зшитого пептиду

The customer wanted a stapled peptide with stabilized α-helix and 22 amino acids. We introduced olefinic amino acids into the solid-phase synthesis and completed the ring closure on the resin. The purity was >90%, а спіраль була на 40% вищою, ніж у лінійного пептиду, і пептид був успішно введений в експерименти на тваринах.

Випадок 3: Дослідження токсинів у національному університеті

Замовник хотів виготовити конотоксин, що містить три пари дисульфідних зв’язків, і попросив кілька компаній зробити його. Ми переробили стратегію захисту, розкрили та з’єднали дисульфідні зв’язки в три етапи та підтвердили правильне з’єднання за допомогою MS/MS. Після того, як клієнт отримав пептид, ми розгадали структуру та опублікували статтю.

Говорячи про ваші потреби в циклічних пептидах?

Незалежно від того, чи потрібен вам складний циклічний пептид для критичних експериментів, чи ви хочете циклізувати лінійний пептид для покращення ефективності лікування, ви можете поговорити з нами. Якщо ви шукаєте науковий-пептид для синтезу циклічних пептидів, принаймні вам не потрібно наступати на яму з самого початку.

Мені потрібно, щоб ти сказав мені:

Пептидні послідовності (або лінійні послідовності)
Як ви хочете циклізувати (перший і останній/бічний ланцюг/дисульфідний зв’язок/зшитий пептид)
Скільки просити (мг/г)
вимоги до чистоти

Коли ти цього хочеш?

Дайте вам оцінку здійсненності та запропонуйте пропозицію протягом 24 годин.