Тривалий синтез пептидів (до 189 амінокислот)

Довгий пептидний синтез|Налаштування довголанцюгового пептиду|Складний пептидний синтез|Пептиди понад 50 мер|Наука-Пептид

Потрібен довгий пептид з більш ніж 50 амінокислотами? Наука-Сервіс Long Peptide Synthesis охоплює 50-189 амінокислот із сегментованою стратегією синтезу, подолання проблем гідрофобної агрегації та низької ефективності синтезу тощо. 20 років досвіду та стабільної доставки. Ласкаво просимо до нас.

Чому складно отримати довгі пептиди?
Кожен, хто займався синтезом пептидів, знає, що проблема виникає, коли пептидний ланцюг довгий: більшість компаній можуть це зробити в межах 20 амінокислот. Коли справа доходить до більш ніж 40 амінокислот, ми починаємо вибирати послідовність. При 60 амінокислотах або більше кількість компаній, які можуть взяти на себе контроль, зменшується вдвічі. Коли мова йде про понад 100 амінокислот, не так багато компаній, які наважуються це зробити.

 

чому Оскільки довгий пептидний синтез стикається з кількома підводними каменями:

Ефективність синтезу знижується: кожне подовження амінокислоти, вихід буде знижено один раз. 30 амінокислотного пептиду, кожен крок 99% виходу, кінцевий вихід все ще становить 74%; 60 амінокислот, кожна стадія все ще становить 99%, кінцевий вихід лише 55%. Насправді вихід багатьох ступенів не може досягати 99%.
Гідрофобна агрегація: коли в довгому пептиді багато гідрофобних амінокислот, пептидний ланцюг починає «злипатися» на смолі, і амінокислоти, що знаходяться за ним, не можуть увійти.

Складність очищення: час утримування довгих пептидів і домішок занадто близькі один до одного для чистого зрізу.
Погана розчинність: коли пептид отримано, його неможливо розчинити, тому експеримент неможливо провести.
Ми вже бували в цих вибоїнах і знаємо, як їх обійти.

1. Довжина: 50-189 амінокислот

2. Стратегія сегментованого синтезу
Найефективніший спосіб боротьби з довгими пептидами - сегментувати їх:
Вибір сегмента: розріжте довгий пептид на 2-4 сегменти по 30-60 амінокислот кожен. Точка розрізу повинна бути розташована в місці, де синтез синтезу низький, наприклад, уникаючи суцільної гідрофобної області.
Синтез фрагментів: кожен фрагмент синтезується та очищається окремо до достатньо високого рівня чистоти.
Зрощення фрагментів: з’єднання фрагментів у розчині або на смолі. Спосіб з'єднання може бути природним хімічним або ферментативним.
Згортання: якщо пептид має дисульфідний зв’язок, він повинен бути згорнутий у правильну конформацію після сплайсингу.

3. Чистота: Залежно від експериментальних вимог

Кожен довгий пептид супроводжується звітом ВЕРХ і MS, що робить дані про чистоту прозорими.

4. Модифікації: довгі пептиди також можуть додати функцію
Флуоресцентне маркування: FITC, TAMRA, хочу побачити, де проходить довгий пептид.
Біотин: витягніть-знизу або спробуйте.
Ізотопне маркування: для кількісного визначення за допомогою ЯМР або мас-спектрометрії.
Фосфорилювання/глікозилювання: імітація пост{0}}трансляційних модифікацій.

1. Ми робимо це 20 років
Довгий пептидний синтез - це не те, що може зробити кожен. Протягом багатьох років ми працювали з багатьма довгими пептидами: трансмембранними білковими фрагментами, пептидами злиття вірусів, амілоїдними білками, антимікробними пептидами тощо. Ми добре розуміємо, які послідовності легко агрегувати та які умови можуть їх зберегти. Якщо ви прийшли до нас на Long Peptide Synthesis, принаймні вам не доведеться наступати на яму з самого початку.

2. Дробовий синтез: не просто розрізання на частини
Сегментація звучить просто, але важливо, де вирізати, довжина кожного сегмента та як їх з’єднати. У нас є кілька принципів:
Розріз у гідрофільній зоні: уникайте розрізання гідрофобного ядра, інакше сегменти збиратимуться самі.
Збалансуйте довжину фрагментів: не робіть один сегмент особливо складним для виконання, а інші — особливо легкими. 3.
Вибір точки з’єднання: для природних хімічних з’єднань потрібен тіоефір на C-кінці та Cys на N-кінці, які мають бути розроблені заздалегідь.

3. Гідрофобні пептиди: спеціальна система розчинників.
Деякі довгі пептиди настільки гідрофобні, що їх неможливо розчинити звичайними розчинниками, тому під час синтезу вони злипаються на смолі. Ми маємо спеціальну систему розчинників і добавки, щоб підтримувати розтягнення пептидного ланцюга під час процесу синтезу, щоб могли входити наступні амінокислоти.

4. Контроль якості: дані на кожному кроці
Контроль якості довгих пептидів складніший, ніж коротких пептидів:
Контроль якості проміжних продуктів: після синтезу кожного фрагмента спочатку виміряйте чистоту та молекулярну масу, а потім перейдіть до наступного кроку після проходження тесту.
Моніторинг процесу з’єднання: випробуйте реакцію з’єднання та виміряйте MS, щоб побачити ефективність з’єднання.
Перевірка кінцевого продукту: ВЕРХ на чистоту, MS на молекулярну масу, MS/MS на правильність послідовності (необов’язково).
Тест на розчинність: надайте рекомендовані розчинники та методи солюбілізації, щоб не отримати пептиди, які не розчиняються.
Виконуючи Long Peptide Synthesis, дані говорять самі за себе, і кожен крок можна відстежити.

5. Від міліграмів до ста міліграмів, до кінця
Міліграми для етапу скринінгу, десять міліграмів для етапу перевірки, сто міліграмів для структурного дослідження - ми можемо взяти все. Той самий проект, той самий аналог, не потрібно повторно -гармонізувати.

• Доставка: ліофілізований порошок, центрифужні пробірки або флакони, захищені азотом.
• Супровідні документи: COA (профіль HPLC + профіль MS), MS/MS (підтвердження послідовності необов’язкове), звіт про синтез (процес сегментації та сплайсингу).
• Додаткові тести: вміст пептидів, ендотоксин, вологість, амінокислотний склад, тест на розчинність.
• Індивідуальна упаковка: порції та маркування відповідно до ваших вимог.
• Перед надсиланням кожен продукт Long Peptide Synthesis двічі-перевіряється, щоб переконатися, що послідовність правильна та чистота відповідає стандартам.

Якщо вам потрібен трансмембранний пептид 80аа або вірусний білок 150аа, ви можете поговорити з нами. Якщо ви попросите Science-Peptide виконати Long Peptide Synthesis, принаймні вам не доведеться пробувати один за одним.

Мені потрібно, щоб ти сказав мені:
Послідовність пептидів (або цільова інформація)
Скільки (міліграм)
вимоги до чистоти
не мають дисульфідних зв’язків чи інших модифікацій

Коли ти цього хочеш?

Дайте вам оцінку здійсненності та запропонуйте пропозицію протягом 24 годин.