Пептиди неоантигену для імунотерапії раку

Пептиди неоантигену|Персоналізований неоантигенний пептидний синтез|Налаштування довгих/нерозчинних пептидів|Наука-Пептид

Потрібні високоякісні неоантигенні пептиди для персоналізованої вакцини проти раку чи скринінгу Т-клітин? Science-Peptide надає послуги синтезу неоантигенних пептидів, підтримуючи довгі пептиди, рефрактерні послідовності, багато-модифікацію, високу чистоту, швидку доставку, щоб допомогти дослідженням імунотерапії пухлин. Ласкаво просимо до нас.

Як знає будь-хто, хто займається імунотерапією пухлин, знайти хорошу мішень непросто, і синтез передбачуваних неоантигенних пептидів високої якості також є проблемою. Ці пептиди часто довгі, нерозчинні та містять гідрофобні амінокислоти, які неможливо синтезувати звичайними методами синтезу. Ми працюємо в області пептидів протягом 20 років, і ми отримали багато замовлень на неоантигенні пептиди, і ми зіткнулися з усіма видами труднощів - деякі потрібно доставити вчасно до терапевтичного вікна пацієнта, деякі пептиди не можна добре розмішати у воді, а деякі мають кілька сайтів мутації, скупчених разом. Саме цей досвід спонукав нас створити систему синтезу спеціально для Neoantigen Peptides, і кожен крок, від розробки маршруту до стратегії очищення, був спрямований на вирішення проблем.

Пептиди неоантигенів - це просто унікальні білкові фрагменти, що утворюються в результаті мутацій ракових клітин. Ці мутації включають точкові мутації, вставні делеції та злиття генів, які призводять до амінокислотних послідовностей, відмінних від послідовностей нормальних клітин. Коли ці пептиди потрапляють на клітинну поверхню за допомогою молекул MHC, імунна система визнає, що «це погано», і атакує.

На практиці неоантигенні пептиди діляться на дві основні категорії:

Довгі пептиди (25-35 а.о.):інкапсулювати місце мутації та навколишні послідовності, потрібно проковтнути дендритними клітинами, обробити та потім представити, зазвичай використовується в персоналізованих вакцинах.

Короткі пептиди (8-11 а.о.):передбачені або підтверджені епітопи зв'язування MHC, які можна використовувати для безпосередньої стимуляції Т-клітин або для тетрамеризації.

Незалежно від того, чи це довгий пептид, чи короткий пептид, у синтезаторів Neoantigen Peptide однакові головні болі: послідовність гідрофобна, її легко «вразити» синтезатором, вихід низький під час очищення, і його потрібно доставити вчасно для лікування пацієнта.

1. Спеціалізується на довгих і нерозчинних пептидах
Значна частина неоантигенних пептидів, які надходять до нас, містить понад 25 амінокислот. Звичайні методи часто неефективні в боротьбі з цими пептидами. Протягом багатьох років ми знайшли кілька способів боротьби з ними:

• Фрагментація: довгий пептид розрізають на кілька сегментів і синтезують окремо, кожен сегмент спочатку очищають, а потім збирають на смолі або в рідкій фазі. Таким чином гарантується якість кожного сегмента, а вихід і чистота кінцевого продукту вищі.
• Синтез-за допомогою мікрохвиль: деякі амінокислоти неохоче вступають у реакцію з мікрохвильовим нагріванням, ефективність реакції буде негайно збільшена, і буде менше побічних-продуктів.
• Спеціальне очищення розчинником: деякі пептиди не розчиняються у звичайних розчинниках, тому ми додаємо ДМСО, гідрохлорид гуанідину та інші сильні розчинники під час очищення, щоб змити їх із колонки, і вони все ще можуть зберігати хороші властивості після ліофілізації.

2. Жодна ділянка мутації не втрачена
Суть Neoantigen Peptides полягає в тих кількох місцях мутації, які ніколи не можна помилитися при синтезі. Ми використовуємо твердофазний-синтез Fmoc для безпосереднього введення не-природних амінокислот і слідкуємо за даними після кожного етапу з’єднання, щоб переконатися, що амінокислотні послідовності сайтів мутації точно відповідають дизайну.

3. Швидкість - це важко
Терапевтичне вікно для пацієнтів з пухлинами настільки широке, що пептиди не мають сенсу, якщо вони пізні. Ми дали Neoantigen Peptides зелене світло:

• Короткі пептиди (<20 aa): 10 working days
• Довгі пептиди (20-35 аа): 12-18 робочих днів
• Прискорено: 7 робочих днів можна обговорити, якщо ви дуже поспішаєте

Минулого року був клієнт, який уже організував своїх пацієнтів і чекав на пептиди для виготовлення вакцини. Кілька наших синтезаторів працювали позмінно, щоб доставити йому всі 30 пептидів протягом двох тижнів.

4. Суворі критерії чистоти та ендотоксину
Коли ви використовуєте щось для людей, ви не можете дозволити собі компроміс щодо якості. Ми пропонуємо пептиди Neoantigen:

• Purity:>90%, >95%, >98% Що б ви не вибрали
• Ендотоксин:<2 EU/mg, or customized according to customer requirements
• Мікробна межа: згідно з Фармакопеєю
• Залишки розчинників: відповідно до ICH Q3C

Звіт COA кожного пептиду супроводжується графіками HPLC та MS, і дані можна відстежити, тому багато клієнтів безпосередньо беруть їх і вносять у декларацію.

5. Грумінг також можна зробити
Для деяких експериментів необхідна «ручка» для неоантигенних пептидів:

• Маркування біотином: тетрамер MHC
• Флуоресцентне маркування (FITC, TAMRA, Cy5): для проточного-фарбування
• Зчеплення білка-носія (KLH, BSA): для імунізації тварин
• Модифікація пальмітинової кислоти: вакцини краще знаходять лімфатичні вузли

Ми можемо зробити все разом, вам не доведеться шукати двох постачальників.

1. 20 років досвіду та багато складних проблем
Ми працюємо в цій галузі протягом 20 років, і ми стикалися з усіма видами складних пептидів, і ми маємо спосіб впоратися з довгими ланцюгами, гідрофобними та повторюваними послідовностями, які є спільними для пептидів Neoantigen, і ми не будемо легко сказати вам, що ми не можемо це зробити. Деякі пептиди, які інші вважають неможливими, ми часто можемо знайти вихід після кількох днів досліджень.

2. Встигання за темпом лікування
Лікування пухлини не може чекати. Ми швидко-відстежили програму неоантигенних пептидів, визначивши пріоритетність усього процесу від оцінки до доставки. Пізніше багато клієнтів сказали нам, що обрали нас, оскільки ми доставили їм пептид у потрібний їм час.

3. Якість можна перевірити
Незалежно від того, чи це сирий пептид для наукових досліджень, чи пептид високої чистоти з низьким вмістом ендотоксину для доклінічних досліджень, ми ставимося до них однаково: не менше одного з перевірки якості та не менше одного з даних, які повинні бути надані. Багато клієнтів безпосередньо копіюють наш звіт COA та додають його до документів декларації.

4. Від міліграма до грама, без заміни
Раннє виявлення – лише кілька міліграмів, токсикологічні дослідження – десятки грамів, клінічні випробування – сотні грамів - від початку до кінця, ми можемо взяти все. Вам не потрібно змінювати той самий вид, і вам не потрібно про це турбуватися.

5. Твоя послідовність, як тільки ми з тобою знаємо
Нова послідовність антигену є основним активом кожного клієнта. Ми підписуємо угоду про конфіденційність, інформація про проект відома лише кільком людям у проектній команді, а система даних захищена. За всі ці роки не було жодного витоку.

Компанія клітинної терапії:у них є пацієнт із меланомою на пізній стадії, який чекає на персоналізовану вакцину. 30 довгі пептиди, 25-35 амінокислот, 8 з яких є надзвичайно гідрофобними, і продуктивність очищення звичайними методами надзвичайно низька. Ми використовували конденсацію фрагментів і спеціальні розчинники для очищення пептидів і доставили їх замовнику протягом двох тижнів, а рівень ендотоксину був нижче 0,05 EU/мг. Пізніше, після лікування пацієнта, кілька нових антиген-специфічних клонів було ампліфіковано за допомогою Т-клітинного аналізу, і клієнт спеціально подзвонив нам, щоб сказати, що «якість пептиду дуже допомогла».

Топовий онкологічний інститут: they want to screen a batch of neoantigen-reactive TCRs and need 200 predicted peptides (9-11 aa). We synthesized all the peptides in three weeks using a high-throughput platform, and each peptide was >Чистота на 95% і підтверджена MS. Клієнт використав ці пептиди для створення тетрамерів і відібрав кілька високо-афінних TCR, які зараз перебувають у доклінічній розробці.

Незалежно від того, чи ви тільки починаєте доклінічні дослідження, чи вже проходите клінічні випробування й вам потрібен персоналізований пептид для вакцини, Science-Peptide зможе з цим впоратися. Наша технічна команда готова вислухати ваші потреби.