Домішки тирзепатиду

Домішки тирзепатиду|Контроль домішок тилпептиду|Спеціальний синтез домішок і підтвердження структури|Наука-Пептид

Tirzepatide Impurities Control - for GLP-1/GIP dual{4}}target Drug Quality Research, generic drug reporting.Science-Peptide забезпечує нестандартний синтез домішок, пов’язаних із тилпептидом, у тому числі делеційних пептидів, окислених домішок, продуктів ексфоліації жирних кислот, димерів тощо, зі структурними підтвердженими даними для підтримки ваших Ми можемо підтримати ваше дослідження спектроскопії домішок із даними структурного підтвердження. Ласкаво просимо до нас.

Тірзепатид (Tirzepatide) — це подвійний агоніст GLP-1/GIP, який придумала Eli Lilly, і він був у розпалі протягом цих двох років. Воно добре знижує цукор і сильно знижує вагу, його називають модернізованою версією «чудодійного препарату для схуднення». Вітчизняні виробники пептидних дженериків, багато хто задивляється на це - після закінчення терміну дії патенту, хто може першим пробігтися по якості досліджень, хто матиме можливість схопити перший дженерик.

 

Однак якість тилпептиду не так легко вивчити. Він більш складний, ніж симетикон, з 39 амінокислотами, бічним ланцюгом жирної кислоти (ейкозандионова кислота) і лінкером. Домішок, які можуть з'явитися в процесі синтезу, значно більше, ніж у звичайних пептидів. Відсутні пептиди, окислювальні домішки, продукти виділення жирних кислот, димери, домішки, пов’язані з лінкером-, повинні контролюватись, кожна має бути чистою.

 

Нами накопичено великий досвід синтезу складних пептидних домішок. Ми спеціалізуємося на вивченні тилпептиду, і ми знаємо, які труднощі виникають у його профілі домішок і які основні елементи контролю. Ми можемо налаштувати синтез різних контрольних домішок тилпептиду відповідно до ваших потреб, з даними підтвердження структури, і допоможемо вам встановити метод, щоб вам було менше шансів отримати доповнення під час подання.

Молекулярна структура тилпептиду визначає, що його профіль домішок набагато складніший, ніж у звичайних пептидів. Коли ми проводимо дослідження домішок, ми в основному зосереджуємось на таких категоріях:

Відсутній пептид
39 амінокислот, будь-яка з яких пропускається в процесі синтезу, є домішкою. Часи утримання відсутніх пептидів на ВЕРХ були широко розподіленими, з різною полярністю відсутніх пептидів у різних положеннях. Деякі відсутні на N-кінці, деякі в середині, а деякі поблизу місця приєднання жирної кислоти. Ми отримали замовлення від клієнта на 15 відсутніх пептидів у різних позиціях, щоб локалізувати всі можливі відсутні домішки в їх процесі.

Окислювальні домішки
Met у послідовності тилпептиду сприйнятливий до окислення до сульфоксиду, а потім до сульфону. Окислені домішки часто з’являються в дослідженнях стабільності та зростають через певний період часу. Ми провели порівняння, в прискорених умовах протягом місяця пік окислення може зрости до понад 0,3%, без контролю.

Продукти виділення жирних кислот
Це домішка, унікальна для тильпептиду. Його бічний ланцюг жирної кислоти (ейкозандіова кислота) приєднаний до лізину через лінкер, і ця модифікація може бути частково відщеплена під час синтезу або зберігання, у результаті чого жирна кислота-видаляє домішки. Більш проблематично те, що виділення може відбуватися в різних місцях - між жирною кислотою та лінкером або між лінкером і пептидом -, що призводить до різних домішок. Ми синтезували кілька домішок, пов’язаних із-жирними кислотами, для наших клієнтів, починаючи від повного видалення до лише невеликої частини.

Димери/полімери
Дві або більше молекул тилпептиду згруповуються разом, утворюючи димер або більше. Молекулярна маса димера вдвічі більша, ніж у основного піку, і це часто широкий пік на ВЕРХ, тому його потрібно спеціально відокремити та очистити, перш ніж його можна буде використовувати як контроль. Ми підготували димери, і знадобилося кілька раундів очищення, щоб досягти чистоти понад 95%.

Домішки,-пов’язані з лінкером
Модифікація тилпептиду жирною кислотою використовує лінкер (наприклад, -Glu, PEG тощо), і цей лінкер сам по собі може викликати побічні реакції під час синтезу, утворюючи домішки з відсутніми або неповними лінкерами. Цей вид домішок не зустрічається у звичайних пептидах, але є унікальним для тилпептиду, який потребує спеціального вивчення.

Дезамідовані домішки
Аспарагін (Asn) і глутамін (Gln) легко дезамідуються в кислотних умовах або при нагріванні, що призводить до ізомерів. У послідовності тилпептиду є кілька Asn і Gln, і домішка дезамідування часто з’являється в тесті на примусову деградацію, тому для визначення місцезнаходження домішки потрібно використовувати контрольний продукт.

Діастереоізомери
Під час довголанцюгового синтезу окремі амінокислоти можуть зазнавати рацемізації, що призводить до діастереоізомерів. Вміст такого роду домішок, як правило, невеликий, але експерти запитають при декларуванні, а краще мати контрольний продукт для підтвердження.

Багато з цих домішок неможливо придбати, і їх потрібно синтезувати на замовлення. Ми виконали багато проектів з налаштування домішок тильпептиду, що охоплюють усі вищезгадані категорії.

Делеція пептидного ряду
We synthesize whatever is missing. For example, the lysine at position 20 is missing, or the amino acid near the fatty acid attachment site is missing. We will synthesize according to your process impurity profile, and the purity is usually >95%, із підтвердженням МС та ЯМР. Ми синтезували набір пептидів із 5 амінокислотними інтервалами від N-кінца до C-кінца.

Окислювальні домішки
Met in Tilpeptide is oxidized to sulfoxide or sulfone, and we can control the oxidation conditions and synthesize the oxidized control product. We can control the oxidation conditions and synthesize the oxidized control. The purity is >95%, і ми можемо надати спектр LC-MS для підтвердження ступеня окислення. Сульфоксид і сульфон розділяються за допомогою ВЕРХ, і ми можемо робити обидва.

Продукти виділення жирних кислот
Це одна з найскладніших домішок у тільпептиді. Ланцюг жирної кислоти може бути повністю або частково вимкнений (наприклад, відсутні останні кілька атомів вуглецю). Ми можемо синтезувати ряд варіантів для різних позицій ланцюга. В одному з найскладніших проектів, які ми виконали, замовник попросив нас синтезувати домішку з 8 атомами вуглецю, відсутніми в ланцюзі жирної кислоти, і нам знадобилося два місяці, щоб це зробити.

Димер
Димери, утворені перехресним-зшиванням або не-ковалентною взаємодією, можна отримати різними методами, виділити й очистити для отримання контролів високої чистоти. Димери важко очищати, але ми маємо досвід, щоб знати, як відокремити мономери.

Домішки,-пов’язані з лінкером
Лінкер (-Glu, PEG тощо) може бути відсутнім або неповним, що призводить до появи ряду пов’язаних домішок. Ми можемо синтезувати різні варіанти з відсутніми лінкерами, укороченими лінкерами або невідповідними лінкерами та допомогти вам створити спектри таких домішок.

Дезамідовані домішки
Для сайтів Asn і Gln у послідовності ми можемо підготувати контролі дезамідованих домішок шляхом примусової деградації або цілеспрямованого синтезу. Різниця в молекулярній масі після дезамідування становить лише 1, що непросто визначити за допомогою MS, тому ми зазвичай використовуємо ЯМР або спеціальні хроматографічні умови для підтвердження.

Інші індивідуальні домішки
Якщо під час дослідження ви виявите нову невідому домішку, ми допоможемо вам проаналізувати структуру та синтезувати її. Надішліть нам зразки, ми зробимо аналіз LC-MS, виведемо структуру, потім спрямований синтез, а потім порівняємо час утримування та мас-спектр, щоб підтвердити згоду. Ми проводили цей процес багато разів, і рівень успіху досить високий.

Розробка та валідація аналітичного методу
Під час налаштування методу ВЕРХ або РХ-MS потрібен контроль домішок для локалізації, визначення поділу, перевірки лінійного діапазону та відновлення. Без контролю у перевірці методу бракує частини. Багато клієнтів просять нас спочатку зробити кілька ключових домішок, щоб налаштувати метод, а потім повільно доповнити решту.

Гетерогенна мас-спектрометрія
Коли декларується генеричний препарат, необхідний комплексний якісний і кількісний аналіз технологічних домішок і продуктів розпаду. Розташування, вміст і структура кожної домішки повинні бути підтверджені контрольним продуктом. Ми бачили, що декларацію інформації було надіслано для заповнення, у дев’яти випадках із десяти домішки цієї частини не зрозуміли.

Дослідження стабільності
Під час-тестів довгострокової стабільності та прискорених тестів необхідно визначити, які продукти деградації є домінуючими та яка тенденція вмісту. За допомогою контролю домішок ми можемо точно кількісно визначити та контролювати. Клієнт перевіряв стабільність препарату тилпептиду та виявив, що пік деградації зростає дуже швидко в прискорених умовах, тому ми проаналізували та синтезували його за допомогою MS, щоб підтвердити структуру, а потім клієнт із полегшенням повідомив про це.

Тестування випуску партії
Після комерціалізації кожну партію АФІ або рецептури необхідно перевірити на відповідну речовину. Контроль домішок є важливим інструментом для тестування випуску.

Інформація про генеричні декларації лікарських засобів
Дослідження домішок є ключовим розділом інформації про реєстрацію. Надання повного профілю домішок і контрольних даних значно знижує ризик повторного випуску.

Випадок 1: фармацевтична компанія, програма генеричних препаратів tilpeptide
Вони розробляють загальну версію тилпептиду і потребують повного набору контролю домішок для перевірки методу. Ми налаштували для них 12 домішок: 5 відсутніх пептидів, 2 окислені домішки, 1 димер, 2 продукти виділення жирних кислот і 2 домішки, пов’язані з лінкером-. Кожен з них має чистоту понад 95% і супроводжується даними МС і ЯМР. Керівник проекту сказав: «Домішок тилпептиду вдвічі більше, ніж інших пептидів, але ви можете виготовити їх усі, і дані повні, що економить нам багато роботи». Пізніше валідація їх методу була успішно завершена, і зараз вони готуються до декларації.

Випадок 2: компанія CRO, профіль домішок
Вони взялися за проект якісного дослідження тилпептиду, який вимагав комплексного аналізу технологічних домішок. Вони надіслали нам необроблені зразки пептидів, і ми виконали LC-MS-аналіз, визначили можливі структури кількох невідомих домішок, потім цілеспрямовано синтезували їх, порівняли час утримування та мас-спектри та підтвердили чотири нові домішки - дві з них були пов’язані з лінкером-, а дві з них були варіантами виділення жирних кислот. Клієнт використав ці дані для уточнення профілів домішок і успішно пройшов схвалення клієнта.

Кейс 3: Дослідження стабільності, біотехнологічна компанія
Вони досліджували стабільність препарату тилпептиду і виявили, що кількість продукту розпаду швидко зростала в умовах прискорення, але вони не знали, що це таке. Ми проаналізували зразок за допомогою LC-MS і припустили, що це домішка дезамідування в певному місці Asn, а потім цілеспрямовано синтезували його та підтвердили порівнянням. Вони провели аналіз, використовуючи цей контроль, і точно відстежували тенденцію продукту розпаду. Пізніше, коли вони подали звіт, ця частина даних була акцентована експертами, і через достовірність даних компенсація не була видана.

Tilpeptide є популярним продуктом, але дослідження домішок є делікатною роботою, особливо продуктів для відлущування жирних кислот і пов’язаних з лінкером-домішок, з якими не можуть впоратися багато виробників. Якщо ви проводите якісне дослідження або загальну розробку тилпептиду та потребуєте контролю домішок, зв’яжіться з нами. Ми зробили велику роботу, ми знаємо, які є труднощі, і ми знаємо, як з них вийти.